Биология. В 3-х томах. Т. 1
- Автор: Грин Найджел, Стаут Уилф
- Год: 1990
- Язык: русский
- Жанр: Биология
Электронная книга - «Биология. В 3-х томах. Т. 1». Краткое содержание книги:
В т. 1 рассматривается систематика вирусов, бактерий, растений и животных, а также основы биохимии и гистологии.
Для студентов-биологов, преподавателей биологии в школе, биологов всех специальностей, учащихся старших классов.
Несвежее молоко (молоко, простоявшее 24 ч при комнатной температуре)
Термостат, настроенный на температуру 35°С
1. Простерилизуйте микробиологическую петлю, введя ее в пламя горелки (подержите ее там, пока она не покраснеет) (рис. 2.20, А).
Рис. 2.20. Стерилизация проволочной петли прокаливанием в пламени горелки и посев штрихом молочных бактерий на чашки Петри с питательным агаром. Наберите капельку молока в петлю. Приподнимите крышку чашки Петри ровно настолько, насколько необходимо, и нанесите штрихи, как изображено на рисунке, стараясь не поцарапать поверхность агара. Каждая линия обозначает одно движение проволочной петли. После каждых шести штрихов прокалите и охладите петлю
2. Дайте петле остыть и затем окуните ее в пробу свежего молока; молоко предварительно хорошо взболтайте.
3. Слегка приподнимите крышку стерильной чашки с агаром и осторожно распределите содержимое петли по поверхности агара, как показано на рис. 2.20, Б.
4. Закройте крышку и снова прокалите петлю в пламени горелки.
5. Пометьте чашку снизу несмываемыми чернилами (или восковым карандашом).
6. Повторите всю процедуру со второй чашкой и другой пробой свежего молока.
7. Простерилизуйте петлю снова и, дав ей остыть, окуните ее в пробу несвежего молока.
8. Распределите содержимое петли по поверхности третьей чашки и затем закройте крышку.
9. Пометьте чашку снизу несмываемыми чернилами.
10. Повторите всю процедуру с четвертой чашкой и второй пробой несвежего молока.
11. Поставьте ваши четыре чашки в термостат при 35°С на 3 сут. Прежде чем ставить чашки в термостат, переверните их вверх дном, чтобы капли конденсата не падали сверху на культуру. После инкубации склейте половинки каждой чашки липкой лентой, чтобы культура не пропала.
12. Опишите внешний вид колоний и сравните ваши результаты с описанием из разд. 2.7.1.
1. Студенты могут заполнить чашки самостоятельно, если есть стерильные пробирки Мак-Картни с питательным агаром.
2. При посеве штрихом число бактерий в каждом следующем штрихе постоянно уменьшается. Этот метод удобнее применять, когда количество бактерий в пробе велико, как, например, в молоке. Его обычно используют для получения чистых колоний бактерий из смешанной культуры.
3. После инкубации чашки можно положить в холодильник и держать там, пока они не понадобятся. Охлаждение препятствует дальнейшему росту бактерий.
4. Когда чашки станут больше не нужны, их следует положить в пакет одноразового использования, проавтоклавировать 15 мин и только затем выбросить.
5. С молоком можно провести и другие опыты. Эксперимент, описанный выше, самый простой. Можно, например, оценить влияние охлаждения. Можно также исследовать влияние пастеризации на содержание бактерий в молоке, тем более если нетрудно получить сырое (непастеризованное) молоко (допустим, прямо с молочной фермы). Для пастеризации молоко разливают по стерильным пробиркам, затыкают пробирки ватными пробками, а затем прогревают в течение 35 мин при 63°С на водяной бане. Третий вариант опыта заключается в том, что берут несколько чашек и инкубируют их при 10°С, а не при 35°С. Такая низкая температура благоприятна для роста Streptococcus lactis и не способствует росту Lactobacillus.
Опыт 2.2. Окрашивание бактерий для изучения их с помощью светового микроскопа
Фазово-контрастный микроскоп позволяет видеть живые клетки, однако чаще все же клетки предварительно фиксируют и окрашивают. Одна из основных методик окрашивания, позволяющая идентифицировать бактерии, — это методика окрашивания по Граму. Этот метод разработал в 1884 г. датский врач Христиан Грам. До окрашивания все клетки бесцветны. После окрашивания грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый, а грамотрицательные — в красный цвет. Мы уже говорили в разд. 2.2.2 ("Клеточная стенка"), чем эти бактерии отличаются друг от друга.
Основной краситель — кристаллический фиолетовый (0,5%-ный водный раствор)
Раствор Люголя
Ацетон — спирт (ацетон: абсолютный спирт в соотношении 50:50) для отмывания красителя
Сафранин (1%-ный водный раствор) для контрастирования
Проволочная петля
Бунзеновская горелка
Тщательно вымытые предметные стекла (протереть спиртом)
Пинцет
Штатив для окрашивания, пристроенный над кюветой или чашкой
Промывалка с дистиллированной водой
Фильтровальная бумага
Иммерсионное масло и микроскоп с иммерсионным объективом